Kardinal Scipione Borghese (1577-1633), som var en lärd och ivrig konstsamlare på sin tid, grundade museets samling. Den förvarades ursprungligen i kardinalens herrgård nära Peterskyrkan, men flyttades till hans nya villa på Pincian Hill på 1620-talet. Samlingen av konstverk från Galleria Borghese består av över 800 målningar, nära hundra skulpturer och olika andra artefakter. Besökare kan förvänta sig att se verk av kända konstnärer som Caravaggio, Raphael och Titian, liksom antik romersk konst.