Kardinal Scipione Borghese (1577-1633), som var en lærd og ivrig kunstsamler på sin tid, grundlagde museets samling. Den var oprindeligt placeret i kardinalens palæ nær Peterskirken, men den blev flyttet til hans nye villa på Pincian Hill i 1620'erne. Samlingen af Borghese-galleriets kunstværker består af over 800 malerier, næsten hundrede skulpturer og forskellige andre artefakter. Besøgende kan forvente at se værker af berømte kunstnere som Caravaggio, Raphael og Titian samt gammel romersk kunst.